2.3 层次分析法评价大连市地下水环境质量层次分析法评价大连市10处国家地下水监测井结果见表8。

用辣根过氧化酶(Horseradish Peroxidase，HRP)直接标记寡核苷酸效率低，因此：HRP主要用于标记多核苷酸片段。选用适当的引物也可用于质粒DNA中插入顺序的标记。

二、探针标记方法(一)探针的放射性核素标记法这里主要以放射性核素豫P为例，介绍核酸探针与标记的连接方法(标记方法)。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：香豆素，DNA聚合酶，核苷酸，病毒。一般采用M13噬菌体体系进行单链DNA探针的标记。此法得到的探针放射活性极高，而高放射性会造成DNA链的破坏，因此标记的DNA探针应立即使用。缺口平移标记法可对环状或线状双链DNA进行标记。

目前市售的试剂盒中，随机引物是用人工合成方法得到的，寡核苷酸片段长度为6个核苷酸残基，含有各种可能的排列顺序(46=4096种排列顺序)。当以poly(A)mRNA为模板时，反转录酶的引物可以是oligo-dT，也可采用特异的寡核苷酸引物，还可采用随机寡核苷酸作为引物。声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有

8类物质色谱峰，谱图见图1。结果显示，无水硫酸镁的回收率相对较高，而且由于样品需要进质谱，无水硫酸镁的干燥去水效果更强，能满足实验分析要求。声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。（2）色谱条件的优化比较了HP-5、VF-17、WAX-58等不同极性毛细管色谱柱对8类物质的响应值，结果表明，采用HP-5、VF-17色谱柱分离时，糠醛、5-甲基糠醛和5-羟甲基糠醛由于化合物均含有醛基，极性稍大，所以色谱峰出现严重的拖尾现象，柱流失相对较大，极性较强的WAX-58色谱柱对8类物质有较高的响应值，且峰形较尖锐。

结果显示，用10mL提取溶剂提取一次所得回收率已完全满足分析要求，并且样品的稀释倍数相对较小，提高了样品的检出限。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：无水硫酸镁，5-甲基糠醛，糠醛，5-羟甲基糠醛。

检出限LOD以信噪比S/N3计，定量下限LOQ以S/N10计，可满足实际样品的测定。③干燥剂的选择和用量选择用10mL乙腈作为提取溶剂，添加标准溶液，通过选择不同的干燥剂无水硫酸钠和无水硫酸镁进行试验，按饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜称取试样2g(饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜，精确至0.01g)于20mL刻度磨口试管中(其中蜂蜜需要加60℃温水5.0mL溶解)，加入10.0mL乙腈，加少量无水硫酸镁，充分振荡摇匀2min，于600r/min离心3min，取上清液过0.45m有机相滤膜后，进行GC-MS/MS分析进行比较，回收率结果见表4。②提取溶剂用量及提取次数的选择用乙腈作为提取溶剂，通过选择不同的溶剂用量(6、8、10、12、15、20mL)进行试验，提取1次、2次、3次进行比较，按称取试样2g(酱油、牛奶，精确至0.01g)于50mL离心管中，加入10.0mL乙腈，250r/min涡旋，振荡1min，超声波提取20min后，加入0.5g氯化钠，0.5g无水硫酸镁，2500r/min涡旋振荡30s，8000r/min离心5min取上清液待净化;取上述待净化液5ml，加入C180.05g，PSA0.05g，无水硫酸镁0.1g，2500r/min涡旋振荡30s，8000r/min离心2min，上清液过0.45m有机相滤膜过滤后，进行GC-MS/MS分析进行比较，回收率结果见表3。（3）标准曲线、线性范围及检出限在经过优化的实验条件下，以峰面积对8类物质浓度作标准曲线，同时在空白样品中，添加一定浓度的标准溶液，计算测定检出限，定量限，线性回归方程，相关系数，线性范围见表5

高速离心机(HealForce公司)。声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。对于纯牛奶，根据GB27602014要求为不得检出，蛋白饮料中苯甲酸的最大使用量是1.0g/kg。碰撞气：氩气，压力为0.2Pa(1.5mT0rr)。

二、结果与讨论1、实验条件的优化（1）样品前处理条件的优化①提取溶剂的选择选用乙酸乙酯、正己烷、乙腈、二氯甲烷、丙酮5种不同极性的溶剂对8种化合物进行萃取实验。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：硫酸镁，糠醛，5-甲基糠醛，对羟基苯甲酸甲酯。

糠醛、5-甲基糠醛在GB2760-2014中规定为允许使用的食品用香料，但在附录表B.1不得添加食品用香料、香精的食品名单中有牛奶、蜂蜜，所以为不得检出。本文采用气相色谱-串联质谱联用快速测定酱油、牛奶、饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜中糠醛类物质和防腐剂类物质，对样品的前处理方法及GC-MS/MS分析条件进行优化，GC-MS/MS多反应监测模式(MRM)进行测定，能够满足酱油、牛奶、饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜中3种糠醛类物质和5种防腐剂的检测。

糠醛类物质在体内不断积累会引起中毒。目前测定这5类防腐剂和3类糠醛类物质含量的方法主要有气相色谱法、气相色谱-质谱法、高效液相色谱法和液相色谱-质谱法。4、样品前处理（1）饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜称取试样2g(饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜，精确至0.01g)于20mL刻度磨口试管中(其中蜂蜜需要加60℃温水5.0mL溶解)，加入10.0mL乙腈，加少量无水硫酸镁，充分振荡摇匀2min，于600r/min离心3min，取上清液过0.45m有机相滤膜后，进行GC-MS/MS分析。饮料类山梨酸最大使用量是0.5g/kg，对羟基苯甲酸酯类是0.25g/kg。酱油是中国传统的调味品，生产中主要用到的添加剂为：苯甲酸钠，山梨酸，对羟基苯甲酸酯类及其钠盐，在GB2760-2014中规定的最大使用量依次是1.0g/kg、1.0g/kg、0.25g/kg。载气：高纯氦气(99.999％)，柱流量1.0mL/min恒定流量模式。

（2）标准液将储备液配制成0.01、0.02、0.05、0.1、0.5、1、2、5、10和50mg/L的标准液，进样分析，以保留时间定性，以峰面积定量。苯甲酸(CAS号：65-85-0)、山梨酸(CAS号：110-44-1)、对羟基苯甲酸甲酯(CAS号：99-76-3)、对羟基苯甲酸乙酯(CAS号：120-47-8)、对羟基苯甲酸丙酯(CAS号：94-13-3)(德国sigma公司，纯度99％)。

5、标准曲线的绘制（1）标准储备液将糠醛、5-甲基糠醛、5-羟甲基糠醛、苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯用乙腈配制成浓度为2000mg/L的溶液，于4℃保存。（2）酱油、牛奶称取试样2g(酱油、牛奶，精确至0.01g)于50mL离心管中，加入10.0mL乙腈，250r/min涡旋，振荡1min，超声波提取20min后，加入0.5g氯化钠，0.5g无水硫酸镁，2500r/min涡旋振荡30s，8000r/min离心5min取上清液待净化;取上述待净化液5ml，加入C180.05g，PSA0.05g，无水硫酸镁0.1g，2500r/min涡旋振荡30s，8000r/min离心2min，上清液过0.45m有机相滤膜过滤后，进行GC-MS/MS分析。

乙腈、丙酮(色谱纯，美国TIDE公司)。而目前同时测定这6类食品中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、糠醛、5-甲基糠醛和5-羟甲基糠醛含量的方法尚未见报道。

同时含糖的食品在加工和贮存过程中，会发生糖的热降解反应和美拉德反应，这两个反应均会产生5-羟甲基糠醛(5-HMF)，进而热分解产生糠醛和5-甲基糠醛。碰撞能量：针对每种化合物进行优化。用外标法绘制出浓度/峰面积工作曲线做标准曲线。结果表明，采用乙腈作为提取溶剂时的回收率更高，最终采用乙腈作为提取溶剂，回收率见表2。

因而建立一种快速、方便、经济的检测方法，有利于保障人们的消费安全。GB/T18932.18-2003即采用液相色谱/紫外检测法测定蜂蜜中的羟甲基糠醛含量，并制定了限量要求。

2、仪器与设备BmkercP450-300三重四极杆质谱仪(C-MS/MS)。按称取试样2g(酱油、牛奶，精确至0.01g)于50mL离心管中，加入10.0mL乙腈，250r/min涡旋，振荡1min，超声波提取20min后，加入0.5g氯化钠，0.5g无水硫酸镁，2500r/min涡旋振荡30s，8000r/min离心5min取上清液待净化;取上述待净化液5ml，加入C180.05g，PSA0.05g，无水硫酸镁0.1g，2500r/min涡旋振荡30s，8000r/min离心2min，上清液过0.45m有机相滤膜过滤后，进行GC-MS/MS分析。

正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯(分析纯，购买于华东医药有限公司)，无水硫酸镁、无水硫酸钠(分析纯，购买于华东医药有限公司)。3、方法（1）色谱条件①气相色谱测定气相色谱条件：色谱柱：WAX-58(25m0.32mm1.2m)弹性石英毛细管柱，进样口温度230℃。

防腐剂是为了防止食品因微生物等引起的腐败变质所添加的，使食品在一般的自然环境中具有一定的保存期。柱升温程序：初温50℃保持0.5min，以25℃/min的速率升温到250℃保持11.5min，共20min。8种物质的定性、定量离子和多反应监测(MRM)参数见表1。一、材料与方法1、材料与试剂标准品：糠醛(CAS号：98-01-1)、5-甲基糠醛(CAS号：620-02-0)、5-羟甲基糠醛(CAS号：67-47-0)(百灵威科技有限公司，纯度98％)。

但目前食品添加剂超量、超范围使用的现象很多，苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类是使用最广泛的防腐剂。质谱条件：电子轰击源(EI)，离子源温度230℃

4、样品前处理（1）饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜称取试样2g(饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜，精确至0.01g)于20mL刻度磨口试管中(其中蜂蜜需要加60℃温水5.0mL溶解)，加入10.0mL乙腈，加少量无水硫酸镁，充分振荡摇匀2min，于600r/min离心3min，取上清液过0.45m有机相滤膜后，进行GC-MS/MS分析。对于纯牛奶，根据GB27602014要求为不得检出，蛋白饮料中苯甲酸的最大使用量是1.0g/kg。

防腐剂是为了防止食品因微生物等引起的腐败变质所添加的，使食品在一般的自然环境中具有一定的保存期。但目前食品添加剂超量、超范围使用的现象很多，苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类是使用最广泛的防腐剂。